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美國Biozellen?基質膠在細胞侵襲實驗中的應用

發布:2021-12-11 15:45:12 瀏覽:240次


美國Biozellen?基質膠在細胞侵襲實驗中的應用

1-5 Biozellen?3D細胞培養基質膠套裝.jpg

 一、應用

?3D細胞球體培養

?小鼠皮下成瘤
?細胞侵襲

?適合用于3D細胞藥物篩檢平臺

?細胞生長和分化

?代謝/毒理學研究

二、試劑盒組分


B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
(對應數量和內容)

貨號.

Components

Amount

Content

B-P-00002-A

A 基質膠 (2X)

4、8、20

0.5mL / tube

B-P-00002-C

C 緩沖溶液 (10X)

1、2、1

1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT

B-P-00002-D

D 緩沖溶液 (10X)

1、2、1

1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT

 三、細胞侵襲實驗準備程序

A、試劑準備:

1、C緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養液 (例如: 無血清DMEM等,用于稀釋A膠) 稀釋C緩沖溶液 (10 X)  (貨號: B-P-00002-C)至C緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋20倍。使用前放置37度水浴槽。 (例如:1 mL C緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清DMEM; 如未使用完畢,可保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)

2、A膠 (1X) 制備 : 將 A膠 (2X) (貨號: B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘,確認完全溶解。再將37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養液取 0.5 mL,加至37 ℃已溶解的 0.5 mL A膠 (2X),配置成1 mL 的 A膠 (1X)。使用前置于37度,可降低A膠黏度。(單次使用,勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )

B、細胞侵襲實驗步驟

1、準備適用24孔板的Transwell裝置(例如:康寧Transwell insert, 8 μm PET membrane)。

2、37 ℃已回溫的C緩沖溶液 (0.5 X)將A膠 (1X) 原液體積稀釋5-20倍,建議一開始可選用15倍。 (根據細胞種類做稀釋比例對比實驗,找出最適合自己實驗體系的稀釋倍數,稀釋倍數越高,膠體越軟,越容易穿透)

3、根據Transwell上室底部面積加入步驟2的 0.1 mL 稀釋后的A膠稀釋液到Transwell上室中。

4、將步驟4在 4 ℃ 冰箱孵育2-3小時。

5、Transwell上室中加入0.1 mL 無血清的細胞懸液,使細胞最終濃度約7.5 x 104 cells/well.。

6、Transwell下室中加入0.8 mL 含10 %血清的細胞培養液做為chemoattractant,吸引細胞進行遷移及分泌基質蛋白酶 (MMP) 侵襲。 (對照組為Transwell下室中加入含0.8ml無血清的細胞培養液)。

7、將細胞培養板在37 ℃, 5 % CO2培養箱孵育24-48 小時。

8、移除培養液,以PBS 清洗2次。

9、用棉簽輕輕擦掉上層未遷移的細胞。

10、加入1 ml 100 % 甲醇室溫固定30分鐘,再以PBS 清洗2次。

11、加入 1 ml 0.1 % 結晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 結晶紫) 室溫染色20 分鐘,再以PBS 清洗2次。

12、Transwell移至載玻片上,在顯微鏡下隨機6-9個視野觀察計算遷移的細胞數。

四、Biozellen?3D細胞培養基質膠套裝

貨號.    B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10                

規格    2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

Storage  4℃保存、 保存兩年


五、案例分享

A.形成3D腫瘤球體成功案例分享

1634208985180434.png

B.Biozellen基質膠被溶解后分離的完整3D細胞結構照片

1634209039195450.png

培養后的3D細胞球體, 在Biozellen基質膠被試劑盒里面的

D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結構


www.bio-zellen.com

 


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